Gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence (FRET)
Tha gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence (FRET) na phròiseas gluasad lùth neo-radaigeach anns a bheil an neach-tabhartais lùth stàite brosnachail air a ghluasad gu staid togarrach an neach-gabhail tro eadar-obrachadh chàraidean dealain eadar-molecular.Chan eil am pròiseas seo a’ toirt a-steach photons agus mar sin chan eil e radaigeach.Tha buannachdan aig a’ mheasadh seo a bhith luath, mothachail agus sìmplidh.
Faodaidh an dath a thathar a’ cleachdadh ann am measadh FRET a bhith co-ionann.Ach anns a 'mhòr-chuid de thagraidhean, thathar a' cleachdadh dathan eadar-dhealaichte.Ann an ùine ghoirid, is e gluasad lùth ath-shuidheachadh aotrom gluasad paidhir dipoles bhon tabhartaiche (dath 1) chun neach-gabhail (dath 2) nuair a tha am buidheann tabhartais air bhioran.San fharsaingeachd, tha speactram sgaoilidhean a’ bhuidheann Donor fluorophore a’ dol thairis air speactram in-ghabhail na buidhne Acceptor.“Nuair a tha an astar eadar an dà fhluorophore iomchaidh (10 - 100 A), faodar gluasad lùth fluorophore bhon tabhartaiche chun neach-gabhail fhaicinn.”Tha an dòigh gluasad lùtha an urra ri structar ceimigeach an neach-gabhail:
1. Air a thionndadh gu crith moileciuil, is e sin, bidh an solas aotrom de ghluasad lùth a 'dol à sealladh.(Is e quencher aotrom a th’ anns an gabhadair)
2. Tha an sgaoileadh a-mach nas dian na an gabhadair fhèin, agus mar thoradh air sin bidh ath-ghluasad ann an speactram fluorescence àrd-sgoile.”(Tha luchd-gabhail nan luchd-sgaoilidh aotrom).
Tha a’ bhuidheann tabhartais (EDANS) agus gine gabhail (DABCYL) ceangailte gu co-ionnan ri substrate nàdarra protease HIV, agus nuair nach eil an t-substrate air a dhì-cheangal, faodaidh DABCYL EDANS a lughdachadh agus an uairsin a bhith neo-aithnichte do fluorine.Às deidh dì-cheangal protease HIV-1, chan eil DABCYL air a chuir às do EDANS tuilleadh, agus faodar EDANS luciferases a lorg às deidh sin.Faodar sùil a chumail air na tha ri fhaighinn de luchd-dìon protease le atharrachaidhean ann an dian fluorescence EDANS.
Tha peptides FRET nan innealan goireasach airson sgrùdadh a dhèanamh air neo-shònrachadh peptidase.Leis gum faodar sùil leantainneach a chumail air a phròiseas ath-bhualadh, tha e na dhòigh goireasach airson gnìomhachd enzyme a lorg.Tha an t-seen a chaidh a thoirt a-mach às deidh dha bannan peptide a bhith air an uisgeachadh leis an tabhartaiche / neach-gabhail a’ toirt seachad tomhas de ghnìomhachd enzyme aig dùmhlachd nanomolar.Nuair a tha am peptide FRET slàn, tha e a’ sealltainn gu bheil an flash a-staigh a’ dol à bith gu h-obann, ach nuair a bhriseas ceangal peptide sam bith mu choinneimh an tabhartaiche / neach-gabhail, bidh e a’ leigeil ma sgaoil flash, a lorgar gu leantainneach agus an uairsin faodar gnìomhachd an enzyme a thomhas.
Ùine puist: Lùnastal-14-2023